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WEPRO7240 Core Kit (CFS-C7)

厂家:天根生化科技(北京)有限公司
  目录号 规 格 价 格
CFS-C7G 226 μl×96 rxn/ 1.2 ml×20 rxn/ 6 ml×4 rxn 28000元
CFS-C7H 226 μl×96 rxn/ 1.2 ml×20 rxn/ 6 ml×4 rxn 28000元
CFS-C7 226 μl×96 rxn/ 1.2 ml×20 rxn/ 6 ml×4 rxn 26000元
产品简介:

本系列试剂?#24515;?#22815;通过质粒模板实现蛋白的大量表达。本系列试剂盒采用转录和翻译非?#21058;?#30340;方法,试剂盒中提供SP6 RNA聚合酶,NTPRNase Inhibitor以及Transcription Buffer LM,加入模板后先完成DNA的转录,再配?#19979;?#32986;无细胞蛋白表达系统预混mix完成mRNA的翻译,该mix中包含蛋白翻译的所有必需酶类、各种tRNA和离子,从而获取目的蛋白。本系列试剂盒可选择小、中、大三?#30452;?#36798;规模,利用双层液相反应法(Bilayer)表达目的蛋白,小规模反应蛋白表达纯化后可达500 μg左右,大规模表达可达4 mg,非常适合western blotCBB染色等蛋?#20934;?#27979;实验和蛋白结构解析以及免疫共沉淀、酶功能检测、抗体检测等常见蛋白质功能解析。特别地,本系列试剂盒还支持多个质粒模板在一个体系中同?#21271;?#36798;,并且可以在表达之后正确模拟体内的蛋白复合体自组装。此外,本系列中的C7HC7G试剂盒专门为表达His标签蛋白和GST标签蛋白做特殊优化,使得纯化后的蛋白纯度更高。


产品特点:

操作简单:采用Bilayer 反应方法,不需要特殊仪器,只需加入模板?#32431;?#36827;行反应

体系灵活:可以根据后续应用自由选择小、中、大三种不同的表达规模

功能模拟:可以同?#21271;?#36798;多个蛋白,并且表达之后的蛋白可以正确模拟体内相互结合的情况

表达高效:一天内完成蛋白表达,蛋白表达量可达0.5-4 mg

适用面广:特别针对His标签蛋白或GST标签蛋白的表达进行特殊优化,提高纯度


保存条件

低于-70保存,避免长期存放于干冰环?#24120;?#21453;复冻融不超过2次。


实验例


建议使用质粒模板进行蛋白表达。可以使用pEU系列质粒作为表达载体,将带有起始密码子和终止密码子的cDNA克隆至载体上,提取质粒后直接用于蛋白表达。亦可使用其他带有SP6启动子的表达载体进行蛋白表达,不要使用T7启动子。



蛋白翻译采用双层液相反应法(Bilayer Reaction Method),通过反应液和麦胚裂解物造成的密度差,相互渗透,在?#22909;?#30456;交处发生反应。随着时间的?#24179;?#28342;液逐渐由两相变为单一的混合物而终止。



使用WEPRO 7240G/H试剂盒分别小规模表达多个GST标签蛋白和His标签蛋白,用考马斯亮蓝(CBB)染色检测(PAGE图)蛋白表达量,并用对应方法纯化后,检测蛋白得率和纯?#21462;?#32467;果显示,WEPRO 7240G/H表达蛋白成功率高,纯化后蛋白得率可达300-600 μg,纯度高,适合下游各类蛋白结构和功能研究。




HIV的病毒感染因子(Viral Infectivity FactorVIF)可以与宿主细胞的细胞因子共同组成E3?#26680;?#36830;?#29992;?#22797;合物,通过?#21040;?#23487;主蛋白入侵宿主细胞。复合物由Rbx1ElonginBElonginCSOCS1Cullin2五个蛋白构成。将前四个蛋白的质粒和GST-tagged Cullin2质粒用WEPRO 7240在一个体?#30340;?#21516;?#21271;?#36798;,GSH纯化后使用CBB染色检测。结果显示,5个蛋白均成功表达,并且经GSH纯化后,5个蛋白均可成功标记,证明5个蛋白在分别表达成功后,在体?#30340;?#32467;合形成了复合体。WEPRO 7240不但可以成功同?#21271;?#36798;多个蛋白,并且可?#21592;?#25345;蛋白的结构和功能,在in vitro体系中正确模拟in vivo蛋白复合体的组装。

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